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प्रथम स्ट्रैंड सीडीएनए सिंथेसिस किट आर1011/आर1012 रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पीसीआर अभिकर्मक
उत्पाद विवरण:
| उत्पत्ति के प्लेस: | चीन |
| ब्रांड नाम: | GDSBio |
| प्रमाणन: | / |
| मॉडल संख्या: | आर1011/आर1012 |
भुगतान & नौवहन नियमों:
| न्यूनतम आदेश मात्रा: | 1 डिब्बा |
|---|---|
| पैकेजिंग विवरण: | छोटा पैकेज या थोक वितरण या OEM |
| प्रसव के समय: | 8कार्य दिवस |
| भुगतान शर्तें: | एल/सी, डी/ए, डी/पी, टी/टी, वेस्टर्न यूनियन, मनीग्राम |
| आपूर्ति की क्षमता: | प्रति दिन 100 बॉक्स/बॉक्स |
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विस्तार जानकारी |
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| बिल्ली। नहीं।: | आर1011/आर1012 | एकाग्रता: | R1011 (20 rxns),R1012 (100 rxns) |
|---|---|---|---|
| उपस्थिति: | बेरंग | समूह: | रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पीसीआर अभिकर्मक |
| गतिविधि: | उत्तीर्ण | प्रवर्धन क्षमता: | / |
| लोगो मुद्रण: | लोगो मुद्रण के साथ | परिवहन पैकेज: | पैकिंग |
| उत्पादन क्षमता: | प्रति दिन 100 बॉक्स/बॉक्स | जमा करने की अवस्था: | -20°C पर स्टोर करें |
| हाई लाइट: | 20 आरएक्सएनएस रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पीसीआर अभिकर्मक,100 आरएक्सएनएस रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पीसीआर अभिकर्मक,20 आरएक्सएनएस प्रथम स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण किट |
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उत्पाद विवरण
आरटी - पीसीआर किट
केवल अनुसंधान के लिए उपयोग करें
बिल्ली संख्या R1011, 20 आरएक्सएनएस
बिल्ली संख्या R1012, 100 rxns
किट के घटक
| अवयव | आर1011 (20 आरएक्सएनएस) | आर1012 (100 आरएक्सएनएस) |
| एम-एमएलवी (200यू/μl) | 20 μl | 100 μl |
| आरनासिन (40यू/μl) | 12 μl | 60 μl |
| ओलिगो(डीटी)15(50μM) | 20 μl | 100 μl |
| रैंडम हेक्सामेर प्राइमर (50μM) | 20 μl | 100 μl |
| 5× प्रथम-स्ट्रैंड बफर | 80 μl | 400 μl |
| RNase मुक्त ddH2हे | 1 मिली | 1 मिली × 5 |
| dNTPs(प्रत्येक 10mM) | 50 μl | 250 μl |
भंडारण
किट के सभी घटकों को -20°C पर संग्रहित किया जाना चाहिए।लंबे समय तक भंडारण के लिए नियंत्रण आरएनए को -70°C पर रखें।
डीलेखन
आरटी-पीसीआर किट को शुद्ध पॉली (ए)+ या कुल आरएनए से प्रथम-स्ट्रैंड सीडीएनए को संश्लेषित करने के लिए अनुकूलित किया गया है।आरटी-पीसीआर के लिए आरटी-पीसीआर किट एक सुविधाजनक प्रारूप में बढ़ी हुई सीडीएनए पैदावार, उच्च संवेदनशीलता और पूर्ण-लंबाई प्रतिलेख प्रदान करती है।आपको सफल प्रथम-स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण के लिए आवश्यक सभी घटक मिलते हैं, जिससे आपका समय बचता है और प्रत्येक प्रयोग के साथ आपकी सफलता सुनिश्चित होती है।किट रिवर्स ट्रांसक्रिप्टेज़ एम-एमएलवी आरटी का एक संस्करण है जिसे आरएनएएस एच गतिविधि को कम करने और बढ़ी हुई थर्मल स्थिरता प्रदान करने के लिए इंजीनियर किया गया है।एंजाइम का उपयोग 42-55 डिग्री सेल्सियस के तापमान रेंज पर सीडीएनए को संश्लेषित करने के लिए किया जाता है, जो अन्य रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस की तुलना में बढ़ी हुई विशिष्टता, सीडीएनए की उच्च पैदावार और अधिक पूर्ण लंबाई वाला उत्पाद प्रदान करता है।
अनुप्रयोग
आरटी-पीसीआर के लिए पहला स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण
सीडीएनए पुस्तकालयों का निर्माण
एक-चरणीय आरटी-पीसीआर
प्राइमर विस्तार
मैंमहत्वपूर्ण नोट्स
राइबोन्यूक्लीज संदूषण से बचना
पूर्ण लंबाई सीडीएनए के संश्लेषण के लिए आरएनए शुद्धता और अखंडता आवश्यक है।RNA को RNase A द्वारा निम्नीकृत किया जा सकता है, जो किसी भी प्रयोगशाला वातावरण में पाया जाने वाला एक अत्यधिक स्थिर संदूषक है।यह सुनिश्चित करने के लिए कि किट के सभी घटकों का कठोरता से परीक्षण किया गया है कि वे आरएनएएस-मुक्त हैं।प्रयोगशाला वातावरण और अभिकर्मकों दोनों को संदूषण से बचाने के लिए, सभी तैयार समाधान आरएनसेज़ से मुक्त होने चाहिए।RNase संदूषण से बचने के लिए सामान्य सिफ़ारिशें:
- सीडीएनए संश्लेषण में उपयोग की जाने वाली सभी ट्यूबों और पिपेट युक्तियों का डीईपीसी-उपचार करें या प्रमाणित न्यूक्लीज-मुक्त लैबवेयर का उपयोग करें।
- आरएनए और सभी अभिकर्मकों को संभालते समय दस्ताने पहनें, क्योंकि त्वचा आरएनएसेज़ का एक सामान्य स्रोत है।दस्ताने बार-बार बदलें।
- उच्च गुणवत्ता वाले पानी (जैसे, DEPC-उपचारित पानी) सहित RNase-मुक्त अभिकर्मकों का उपयोग करें।
- RNA को RNases की गतिविधि से बचाने के लिए Dongsheng RNasin (#R2011) जैसे RNase अवरोधक का उपयोग करें।
- उपयोग में न होने पर सभी किट घटकों को कसकर सील करके रखें।रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रतिक्रिया के दौरान सभी ट्यूबों को कसकर बंद रखें।
टेम्पलेट आरएनए
मानक तरीकों से अलग किया गया कुल सेलुलर आरएनए किट के साथ उपयोग के लिए उपयुक्त है।सीडीएनए संश्लेषण प्रतिक्रिया को बाधित करने से बचने के लिए शुद्ध आरएनए लवण, धातु आयन, इथेनॉल और फिनोल से मुक्त होना चाहिए।आरएनए के इथेनॉल अवक्षेपण द्वारा ट्रेस संदूषकों को हटाया जा सकता है, इसके बाद ठंडे 75% इथेनॉल के साथ गोली की दो धुलाई की जा सकती है।आरटी-पीसीआर अनुप्रयोगों के लिए, टेम्पलेट आरएनए डीएनए संदूषण से मुक्त होना चाहिए।सीडीएनए संश्लेषण से पहले, डीएनए की ट्रेस मात्रा को हटाने के लिए आरएनए को DNase I के साथ इलाज किया जा सकता है।DNase I को उपयोगकर्ता द्वारा प्राप्त किया जाना चाहिए।हमेशा एक नियंत्रण (आरटी-माइनस) प्रतिक्रिया करें जिसमें रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस एंजाइम को छोड़कर आरटी-पीसीआर के सभी घटक शामिल हों।
RNase H पाचन
पीसीआर चरण की संवेदनशीलता को सीडीएनए से आरएनए टेम्पलेट को हटाकर (विशेष रूप से लंबे टेम्पलेट्स के लिए) बढ़ाया जा सकता है: प्रथम-स्ट्रैंड संश्लेषण के बाद आरएनएएस एच के साथ पाचन द्वारा आरएनए हाइब्रिड अणु।प्रथम-स्ट्रैंड संश्लेषण के दौरान RNase H की उपस्थिति टेम्पलेट mRNA को ख़राब कर देगी, जिसके परिणामस्वरूप पूर्ण-लंबाई cDNA संश्लेषण में कमी आएगी और प्रथम-स्ट्रैंड cDNA की पैदावार में कमी आएगी।
प्राइमरों
पहले स्ट्रैंड सीडीएनए के संश्लेषण को ऑलिगो (डीटी) 15 प्राइमर, यादृच्छिक प्राइमर या जीन-विशिष्ट प्राइमर के साथ प्राइम किया जा सकता है।
यूकेरियोटिक एमआरएनए के 3'-छोर पर मौजूद पॉली (ए) पूंछ से ओलिगो (डीटी) 15 प्राइम सीडीएनए संश्लेषण।रैंडम प्राइमर कुल आरएनए आबादी (आरआरएनए और एमआरएनए) से सीडीएनए संश्लेषण शुरू करते हैं।इसलिए, पहले स्ट्रैंड संश्लेषण के लिए यादृच्छिक प्राइमरों का उपयोग करने से ऑलिगो (डीटी) 15 प्राइमर की तुलना में उत्पन्न सीडीएनए की अधिक जटिलता होती है।परिणामस्वरूप, बाद की पीसीआर प्रतिक्रियाओं की संवेदनशीलता और विशिष्टता कम हो सकती है।हालाँकि, ऐसे कई अनुप्रयोग हैं जहां यादृच्छिक प्राइमरों का उपयोग करना फायदेमंद है, जैसे पॉली (ए) पूंछ के बिना एमआरएनए का उपयोग करके सीडीएनए संश्लेषण, या पॉली (ए)-समृद्ध आरएनए नमूनों का उपयोग करके सीडीएनए संश्लेषण।
जीन-विशिष्ट प्राइमरों का उपयोग कुल आरएनए या एमआरएनए के पूल से विशिष्ट सीडीएनए को संश्लेषित करने के लिए किया जाता है और इसे उपयोगकर्ता द्वारा प्राप्त किया जाना चाहिए।
पहला- एसट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण प्रक्रिया
पहली - स्ट्रैंड सीडीएनए प्रतिक्रिया एक व्यक्तिगत प्रतिक्रिया के रूप में या विभिन्न आरएनए टेम्पलेट्स के साथ समानांतर प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला के रूप में की जा सकती है।इसलिए, अभिकर्मकों को अलग-अलग मिलाकर प्रतिक्रिया मिश्रण तैयार किया जा सकता है या टेम्पलेट आरएनए को छोड़कर सभी घटकों वाला एक मास्टर मिश्रण तैयार किया जा सकता है।आरएनए टेम्पलेट की संरचना के आधार पर, आरएनए विकृतीकरण और प्राइमर एनीलिंग के लिए अलग-अलग चरण आरटी-पीसीआर परिणामों में सुधार कर सकते हैं।
पीरोटोकोल
मैं।पहला स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण
1. निम्नलिखित अभिकर्मकों को संकेतित क्रम में बर्फ पर एक बाँझ, न्यूक्लीज-मुक्त ट्यूब में जोड़ें:
| टेम्पलेट आरएनए |
पॉली(ए) एमआरएनए या विशिष्ट आरएनए |
1-5 μg |
| भजन की पुस्तक |
ऑलिगो (डीटी)15भजन की पुस्तक या रैंडम हेक्सामेर प्राइमर |
1 μl 1 μl |
| डीईपीसी-उपचारित पानी | से 12.4 μl | |
| कुल मात्रा | 12.4 μl | |
2. धीरे-धीरे मिलाएं, थोड़ी देर के लिए सेंट्रीफ्यूज करें और 5 मिनट के लिए 70°C पर इनक्यूबेट करें।बर्फ पर ठंडा करें, नीचे घुमाएँ और शीशी को वापस बर्फ पर रखें।
3. निम्नलिखित सीडीएनए संश्लेषण मिश्रण तैयार करें, निम्नलिखित घटकों को संकेतित क्रम में जोड़ें:
| 5× प्रथम-स्ट्रैंड बफर | 4 μl |
| dNTPs(10 एमएम प्रत्येक) | 1 μl |
| आर.एन.एस.आई.एन | 0.6 μl |
| एम MLV | 1 μl |
4. धीरे से मिलाएं और थोड़ी देर के लिए सेंट्रीफ्यूज करें।
5. ऑलिगो(डीटी) के लिए15, 42°C पर 60 मिनट तक सेते रहें।यादृच्छिक हेक्सामर प्राइमेड संश्लेषण के लिए, 37°C पर 60 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें।
6. 5 मिनट के लिए 70°C पर गर्म करके प्रतिक्रिया समाप्त करें।
रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रतिक्रिया उत्पाद का उपयोग तुरंत दूसरे स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण प्रतिक्रियाओं में किया जा सकता है या एक सप्ताह से भी कम समय के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है।लंबे समय तक भंडारण के लिए, -70°C की अनुशंसा की जाती है।
द्वितीय.प्रथम स्ट्रैंड सीडीएनए का पीसीआर प्रवर्धन
पहले स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण के उत्पाद का उपयोग सीधे पीसीआर या क्यूपीसीआर में किया जा सकता है।पहले स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण प्रतिक्रिया मिश्रण की मात्रा कुल पीसीआर प्रतिक्रिया मात्रा के 1/10 से अधिक नहीं होनी चाहिए।आम तौर पर, पहले स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण प्रतिक्रिया मिश्रण के 2 μl का उपयोग 50 μl कुल मात्रा में बाद के पीसीआर के लिए टेम्पलेट के रूप में किया जाता है।
डोंगशेंग बायोटेक आपको पीसीआर सफलता प्राप्त करने में मदद करने के लिए उत्पादों की विभिन्न श्रृंखला प्रदान करता है।एंजाइमों के लिए, हमारे टैक पॉलीमरेज़, एचएस टैक डीएनए पॉलीमरेज़, एफएस टैक डीएनए पॉलीमरेज़, पीएफयू डीएनए पॉलीमरेज़ और फ़्यूज़न पीएफयू डीएनए पॉलीमरेज़ उच्च निष्ठा, कुशल, संवेदनशीलता पीसीआर प्रदर्शन प्रदान करते हैं।हमारे पास लंबे पीसीआर प्रदर्शन के लिए लॉन्ग टैक डीएनए पॉलीमरेज़ भी है।
