गोल्ड रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पीसीआर अभिकर्मक R3001 2000U

गोल्ड रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस R3001(2,000U)

जीपुराना रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस

केवल अनुसंधान के लिए उपयोग करें

अवयव

भंडारण

इस अभिकर्मक को -30~15°C पर रखा जाना चाहिए.

विवरण

गोल्ड रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस द्वारा प्राप्त एक नया रिवर्स ट्रांसक्रिप्टेज़ हैकृत्रिम परिवेशीयएम-एमएलवी (आरएनएएस एच-) रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस पर आधारित आणविक विकास।सीडीएनए के पहले स्ट्रैंड को 37~55°C पर संश्लेषित किया जा सकता है।गोल्ड रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस ने संवेदनशीलता, विशिष्टता, थर्मल स्थिरता और आधे जीवन में काफी सुधार किया है, जो जटिल माध्यमिक संरचना वाले आरएनए टेम्पलेट्स के रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए बहुत उपयुक्त है।गोल्ड रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस में मजबूत पोलीमराइजेशन और विस्तार क्षमता होती है, जिसका उपयोग लंबी सीडीएनए के संश्लेषण और पूर्ण लंबाई वाली सीडीएनए लाइब्रेरी के उच्च अनुपात के निर्माण के लिए किया जा सकता है।

यूएनआईटीडीefinition

पॉली (आरए)·ओलिगो (डीटी) का उपयोग टेम्पलेट/प्राइमर के रूप में किया गया था।10 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर, एसिड-अघुलनशील पदार्थ के रूप में 1 एनएमओएल डीटीटीपी जोड़ने के लिए आवश्यक एंजाइम की मात्रा को गतिविधि की 1 इकाई (यू) के रूप में परिभाषित किया गया था।

क्यूवास्तविकतासीनियंत्रण

एक्सोन्यूक्लिज़ अवशेष का पता लगाना: इस उत्पाद के 200 यू और 50 पीएमओएल सिंगल-स्ट्रैंडेड डीएनए सब्सट्रेट को 16 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया गया था, और विकृतीकरण पेज इलेक्ट्रोफोरेसिस के बाद डीएनए इलेक्ट्रोफोरेसिस बैंड नहीं बदला।

एंडोन्यूक्लिज़ अवशेषों का पता लगाना: इस उत्पाद के 200 यू और पीबीआर 322 डीएनए के 0.3 μg को 4 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था, और प्लास्मिड के इलेक्ट्रोफोरेसिस बैंड को एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा नहीं बदला गया था।

RNase अवशेषों का पता लगाना: 200 यू और 293 सेल आरएनए के 1 μg के उत्पाद को 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था, और आरएनए के इलेक्ट्रोफोरेसिस बैंड को एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा अपरिवर्तित किया गया था।

ई कोलाईडीएनए अवशेष का पता लगाना: 60 यू में न्यूक्लिक एसिड अवशेष का पता लगाया गया थाइ.कोलाईजीडीएनए-विशिष्ट टैक्मैन क्यूपीसीआर, और का अवशेषइ.कोलाईजीनोम 10 प्रतियों से कम था।

कार्यात्मक पहचान 1: 200 यू एंजाइम को रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन सिस्टम में जोड़ा गया था, 1 μg हेला कोशिकाओं का कुल आरएनए टेम्पलेट, ओलिगो (डीटी) के रूप में उपयोग किया गया था।₂₃प्राइमर के रूप में, और प्रतिक्रिया 45 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर आयोजित की गई थी। पीसीआर प्रवर्धन के लिए 1/10 सीडीएनए उत्पाद लिया गया थाविनजीन.ईबी स्टेनिंग के साथ एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन ने एक 4.6 केबी बैंड दिखाया।

कार्यात्मक पहचान 2: 200 यू एंजाइम को रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन सिस्टम में जोड़ा गया था, 1 पीजी हेला सेल कुल आरएनए को टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल किया गया था, ओलिगो (डीटी)₂₃प्राइमर के रूप में, और प्रतिक्रिया 30 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर आयोजित की गई थी। पीसीआर प्रवर्धन के लिए 1/10 सीडीएनए उत्पाद लिया गया थाGAPDHजीन.ईबी स्टेनिंग के साथ एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन ने एकल 550 बीपी बैंड दिखाया।

कार्यात्मक पहचान 3: 500 एनजी हेला कोशिकाएं टेम्पलेट के रूप में कुल आरएनए, ओलिगो (डीटी)₂₃प्राइमर के रूप में वीएन, 45 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस प्रतिक्रिया। पीसीआर प्रवर्धन के लिए 1/10 सीडीएनए उत्पाद लिया गया थापोलεजीन.एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन, ईबी धुंधलापन, एक एकल 7.1 केबी (जीसी-रिच) बैंड देखा जा सकता है।

मैटर्सएनईडिंगएध्यान

RNase संदूषण को रोकें

कृपया प्रायोगिक क्षेत्र को साफ रखें। ऑपरेशन के दौरान साफ ​​दस्ताने और मास्क पहनने चाहिए।प्रयोग में प्रयुक्त केन्द्रापसारक ट्यूबों, पिपेटिंग टिपों और अन्य उपभोग्य सामग्रियों के लिए आरएनएज़-मुक्त सुनिश्चित किया जाएगा।

प्राइमर चुनेंआयन

अनुवर्ती प्रयोगमैंएस पीसीआर

यदि टेम्पलेट यूकेरियोटिक मूल का है, तो ओलिगो डीटी को आम तौर पर प्राथमिकता दी जाती है, पूर्ण लंबाई सीडीएनए की अधिकतम उपज के लिए यूकेरियोटिक एमआरएनए की 3 'पॉली ए पूंछ के साथ जोड़ा जाता है।

जीन विशिष्ट प्राइमरों (जीएसपी) में उच्चतम विशिष्टता होती है। हालांकि, कुछ मामलों में, पीसीआर प्रतिक्रिया के लिए उपयोग किया जाने वाला जीएसपी सीडीएनए के पहले स्ट्रैंड के संश्लेषण को प्रभावी ढंग से निर्देशित नहीं कर सकता है। इस बिंदु पर, रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन को ओलिगो डीटी या रैंडम का उपयोग करके फिर से किया जा सकता है हेक्सामर्स

रैंडम हेक्सामर्स की विशिष्टता सबसे कम होती है, और एमआरएनए, आरआरएनए और टीआरएनए सहित सभी आरएनए को रैंडम हेक्सामर्स के लिए टेम्पलेट के रूप में उपयोग किया जा सकता है। रैंडम हेक्सामर्स का उपयोग प्राइमर के रूप में किया जा सकता है जब लक्ष्य क्षेत्र में एक जटिल माध्यमिक संरचना या उच्च जीसी सामग्री होती है , या जब टेम्प्लेट प्रोकैरियोटिक है और ओलिगो डीटी या जीन-विशिष्ट प्राइमर (जीएसपी) का उपयोग प्रभावी ढंग से सीडीएनए संश्लेषण का मार्गदर्शन नहीं कर सकता है।

अनुवर्ती प्रयोगमैंएसक्यूपीसीआर

रैंडम हेक्सामर्स के साथ मिश्रित ओलिगो डीटी के परिणामस्वरूप एमआरएनए के प्रत्येक क्षेत्र में समान सीडीएनए संश्लेषण दक्षता प्राप्त हुई, जिससे मात्रात्मक परिणामों की प्रामाणिकता और दोहराव में सुधार करने में मदद मिली।

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