चीनी निर्माताओं से लागत प्रभावी अनुक्रमण लाइब्रेरी निर्माण किट

चीनी निर्माताओं से लागत प्रभावी अनुक्रमण लाइब्रेरी निर्माण किट

उत्पाद विवरण:

उत्पत्ति के प्लेस: चीन
ब्रांड नाम: GDSBio
प्रमाणन: ISO9001, ISO13485
मॉडल संख्या: KM001-ए, KM001-बी

भुगतान & नौवहन नियमों:

न्यूनतम आदेश मात्रा: 1 किट
मूल्य: US $0.2-0.75 / Piece
पैकेजिंग विवरण: कार्टन पैकेजिंग
प्रसव के समय: 8कार्य दिवस
भुगतान शर्तें: एल/सी, डी/ए, डी/पी, टी/टी, वेस्टर्न यूनियन, मनीग्राम
आपूर्ति की क्षमता: 5000 किट/सप्ताह
सबसे अच्छी कीमत संपर्क करें

विस्तार जानकारी

बिल्ली। नहीं।: KM001-ए, KM001-बी ट्यूब की विशिष्टता: KM001-A/24 rxns; KM001-B/96 rxns
अनुक्रमण मंच: एमजीआई इनपुट सामग्री: डीएनए
शेल्फ जीवन: 12 महीने भंडारण: -20°C
हाई लाइट:

निष्क्रियता डिस्पोजेबल वायरस सैंपलिंग ट्यूब

,

एफडीए डिस्पोजेबल वायरस सैंपलिंग ट्यूब

,

वीटीएम निष्क्रिय वायरस सैंपलिंग ट्यूब

उत्पाद विवरण

फास्ट डीएनए लाइब्रेरी तैयारी किटएमजीआई के लिए

[प्रोडक्ट का नाम]

एमजीआई के लिए फास्ट डीएनए लाइब्रेरी तैयारी किट

[बिल्ली।सं./विशेषता]

KM001-A/24 rxns;KM001-B/96 rxns;नमूना बोरी/ 6 आरएक्सएनएस

[उत्पाद वर्णन]

एमजीआई उच्च-थ्रूपुट अनुक्रमण प्लेटफ़ॉर्म पर लक्ष्य करते हुए, यह किट एक ट्यूब में एक सुविधाजनक और सार्वभौमिक डीएनए लाइब्रेरी निर्माण योजना प्रदान करती है।यह अंतिम मरम्मत और ए-टेलिंग को एक चरण में जोड़ता है, और अभिकर्मकों को अत्यधिक प्रीमिक्स किया जाता है, जिससे लाइब्रेरी निर्माण का समय काफी कम हो जाता है और कठिन चरणों के कारण होने वाली त्रुटि कम हो जाती है।खंडित डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए की अंतिम तैयारी, एडाप्टर बंधाव, प्रवर्धन और शुद्धिकरण लगभग 2 घंटे के भीतर किया जा सकता है।पूर्ण लाइब्रेरी मात्रा का ठहराव डीएसडीएनए फ्लोरोसेंट डाई विधि (उदाहरण के लिए, थर्मो क्यूबिट फ्लेक्स फ्लोरोमीटर) या लाइब्रेरी को उचित एकाग्रता में पतला करने के बाद पूर्ण मात्रा का ठहराव पीसीआर द्वारा किया जा सकता है।

[नमूना प्रकार]

आवेदन नमूना प्रकार अनुशंसित राशि
संपूर्ण जीनोम अनुक्रमण उच्च गुणवत्ता वाले जटिल जीनोम 50ng-1μg
संपूर्ण एक्सोम का लक्ष्य कैप्चर अनुक्रमण उच्च गुणवत्ता वाले जटिल जीनोम 10ng-1μg
संपूर्ण जीनोम का लक्ष्य कैप्चर अनुक्रमण एफएफपीई डीएनए ≥50ng
संपूर्ण जीनोम का लक्ष्य कैप्चर अनुक्रमण सीएफडीएनए/सीटीडीएनए ≥100pg
संपूर्ण जीनोम अनुक्रमण माइक्रोबियल जीनोम 1ng-1μg
चिप-Seq चिप डीएनए ≥100pg
लक्षित अनुक्रमण एम्प्लिकॉन ≥100pg

[भंडारण की स्थिति और शेल्फ जीवन]

सभी अभिकर्मकों को -20°C पर संग्रहित किया जाना चाहिए।लिगेशन बफ़र क्रिस्टल के लिए कम तापमान पर अवक्षेपित होना सामान्य बात है, उपयोग से पहले इसे कमरे के तापमान पर संतुलित किया जाना चाहिए।उत्पाद 12 महीने के लिए वैध है।

[अवयव]

अवयव 24 आरएक्सएनएस 96 आरएक्सएनएस
अंतिम मरम्मत एवं ए-टेलिंग मिक्स 480 μl 4×480 μl
फास्ट डीएनए लिगेज 120 μl 2×240 μl
फास्ट लिगेशन बफर 600 μl 4×600 μl
2× HIFI लाइब्रेरी पीसीआर मास्टर मिक्स 600 μl 4×600 μl
एमजीआई के लिए प्राइमर मिक्स* 120 μl 480 μl

* यदि एक से अधिक नमूने हैं, तो #KM002 और #KM003 एडाप्टर प्राइमर मिश्रण की अनुशंसा की जाती है।यह किट प्राइमर का एक सेट प्रदान करती है।

नोट: अनुशंसित चयन मोती: #NC1011 GDSPure DNA चयन मैगबीड्स या AMPure XP मोती।

[टिप्पणियाँ]

1. हम दो प्रकार के यूनिवर्सल एडाप्टर प्राइमर सेट (#KM002 और #KM003, अलग से खरीदे गए) प्रदान करते हैं, लेकिन ग्राहक अन्य निर्माताओं से भी चुन सकते हैं या एमजीआई अनुक्रमण प्लेटफ़ॉर्म के लिए अपने स्वयं के एडाप्टर को संश्लेषित कर सकते हैं।बहुत अधिक एडॉप्टर से एडॉप्टर डिमर का निर्माण होगा, और अपर्याप्त एडॉप्टर से कम लाइब्रेरी आउटपुट होगा।इसलिए, उपयुक्त एडाप्टर एकाग्रता पुस्तकालय की एकाग्रता और गुणवत्ता निर्धारित करती है।डीएनए इनपुट की विभिन्न मात्राओं के लिए अनुशंसित एडॉप्टर सांद्रता निम्नलिखित तालिका में दिखाई गई है:

तालिका 1 एडॉप्टर की अनुशंसित उपयोग सांद्रता

डीएनए इनपुट अनुशंसित सांद्र.एडाप्टर के लिए एडाप्टर: मोल अनुपात डालें जीडीएस एडाप्टर कमजोर पड़ने की डिग्री*
1μg 10μM 10:1 कोई पतलापन नहीं
500ng 10μM 20:1 कोई पतलापन नहीं
250ng 10μM 40:1 कोई पतलापन नहीं
100ng 7.5μM 100:1 3:4
50ng 5μM 200:1 1:2
25ng 2.5μM 200:1 1:4
1ng 1μM 200:1 1:10

* एडॉप्टर और डाइलुएंट के वॉल्यूम अनुपात के रूप में व्यक्त किया गया

2. 2× HIFI लाइब्रेरी पीसीआर मास्टर मिक्स में प्रयुक्त एंजाइम एक बी परिवार डीएनए पोलीमरेज़ है, जिसमें 5 '-3' पोलीमरेज़ और 3 '-5' एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधियां हैं, लेकिन 5 '-3' एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधियों का अभाव है।इसमें उच्च निष्ठा और एकरूपता और मजबूत टिकाऊ संश्लेषण क्षमता है।लाइब्रेरी आउटपुट के लिए प्रवर्धन चक्रों की संख्या का सख्त नियंत्रण विशेष रूप से महत्वपूर्ण है।निम्न तालिका डीएनए इनपुट की विभिन्न मात्राओं के अनुरूप प्रवर्धन चक्रों की अनुशंसित संख्या दिखाती है:

तालिका 2 विभिन्न नमूना इनपुट के अनुरूप प्रवर्धन चक्रों की अनुशंसित संख्या

इनपुट डीएनए प्रवर्धन चक्रों की अनुशंसित संख्या
100ng लाइब्रेरी 1μg लाइब्रेरी
1μg 0 2-5
500ng 0 2-5
250ng 1-3 5-7
100ng 2-4 6-8
50ng 4-6 8-10
25ng 5-7 9-12
10ng 7-9 11-13
5ng 9-11 13-14
2.5ng 10-12 14-16
1ng 11-13 15-17

नोट: 1. उपरोक्त तालिका 150bp मानक डीएनए का उपयोग करके परीक्षण परिणाम दिखाती है, जो केवल संदर्भ के लिए है।

2. यदि अपूर्ण कनेक्टर्स का उपयोग किया जाता है, तो पूर्ण लाइब्रेरी प्राप्त करने के लिए चक्रों की न्यूनतम संख्या (1-3) को बढ़ाया जाना चाहिए।

3. यदि इनपुट डीएनए की गुणवत्ता खराब है, या पुस्तकालय निर्माण के दौरान आकार का चयन किया जाता है, तो प्रवर्धन चक्रों की संख्या उचित रूप से बढ़ाई जानी चाहिए।

[मानक पुस्तकालय निर्माण प्रक्रिया]

मरम्मत समाप्त करें

नोट: यदि इस चरण से पहले खंडित डीएनए 45 μl से अधिक है, या बफर अंतिम मरम्मत बफर के साथ असंगत है, तो पहले एक चुंबकीय मनका शुद्धिकरण किया जाना चाहिए।

1. 200 μl पीसीआर ट्यूब में निम्नलिखित प्रतिक्रिया तैयार करें:

अभिकर्मकों आयतन
खंडित डीएनए चर
अंतिम मरम्मत एवं ए-टेलिंग मिक्स 20 μl
डीडीएच2हे 65 μl तक

2. भँवर को धीरे से घुमाएँ और अच्छी तरह मिलाने के लिए थोड़ी देर नीचे घुमाएँ, थोड़ी देर के लिए सेंट्रीफ्यूज करें और सभी तरल को ट्यूब के नीचे इकट्ठा करें।

3. थर्मल साइक्लर में निम्नलिखित प्रतिक्रिया करें:

तापमान समय
20°से 15 मिनट
65°से 15 मिनट
4°से

अनुकूलक एलइगेशन

1. अंतिम तैयारी के बाद जितनी जल्दी हो सके बंधाव प्रतिक्रिया के साथ आगे बढ़ें।

2. एडॉप्टर को तालिका 1 के अनुसार पतला करें।

3. निम्नलिखित प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करें:

अभिकर्मकों आयतन
अंतिम मरम्मत और ए-टेलिंग उत्पाद 65 μl
फास्ट लिगेशन बफर 25 μl
फास्ट डीएनए लिगेज 5 μl
एमजीआई के लिए एडाप्टर एक्स 5 μl
कुल 100 μl

4. भँवर को धीरे से घुमाएँ और अच्छी तरह मिलाने के लिए थोड़ी देर नीचे घुमाएँ, थोड़ी देर सेंट्रीफ्यूज करें और सभी तरल को ट्यूब के नीचे इकट्ठा करें।

5. थर्मल साइक्लर में निम्नलिखित प्रतिक्रिया करें:

तापमान समय
20°से 15 मिनट
4°से

अनुशंसितएसके लिए समाधानपीसीआर सफाई/आकार चयन(विशिष्ट चुंबकीय मनका मात्रा को वास्तविक नमूने के अनुसार समायोजित किया जाना चाहिएआकार)

1. एक उपयुक्त सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 100 μl लिगेशन उत्पाद तैयार करें।

2. नमूने में 100 μl पुनः निलंबित डीएनए चयन चुंबकीय मोतियों को जोड़ें।धीरे-धीरे पिपेट से 10 बार (या 30 सेकंड के लिए भंवर) फूंकें।कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए नमूनों को सेते हैं।

3. मोतियों को सतह पर तैरनेवाला से अलग करने के लिए ट्यूब को एक उपयुक्त चुंबकीय रैक पर रखें।जब घोल साफ हो जाए, तो सतह पर तैरने वाले पदार्थ को पिपेट से सावधानीपूर्वक हटा दें और हटा दें (मोतियों को न फेंकें)।

4. चुंबकीय रैक में रहते हुए ट्यूब में 80% ताजा तैयार इथेनॉल का 200 μl जोड़ें।30 सेकंड के लिए कमरे के तापमान पर सेते हैं, और फिर सतह पर तैरनेवाला को सावधानीपूर्वक हटा दें और त्याग दें (मोतियों को परेशान न करें)।

5. चरण 4 को कुल दो बार धोने के लिए एक बार दोहराएं।

ध्यान दें: दूसरी बार धोने के बाद सभी दिखाई देने वाले तरल पदार्थ को निकालना सुनिश्चित करें।

6. मोतियों को तब तक हवा में सुखाएं जब तक कि चुंबकीय मोतियों की सतह पर कोई स्पष्ट चमक न रह जाए, जबकि ट्यूब ढक्कन खुले हुए चुंबकीय रैक पर हो।

नोट: मोतियों को ज़्यादा न सुखाएं, इससे डीएनए की रिकवरी कम हो सकती है।जब मोती चटकने लगें, तो वे बहुत सूखे हैं।

7. ट्यूब को चुंबकीय रैक से हटा दें।ट्यूब में 22 μl रेफरेंस बफर (10mM ट्रिस-एचसीएल, pH8.0-8.5) जोड़ें।कम से कम 10 बार या भंवर मिक्सर पर 30 सेकंड के लिए ऊपर और नीचे पाइपिंग करके अच्छी तरह मिलाएं।कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट तक सेते रहें।

8. ट्यूब को चुंबकीय रैक पर रखें।5 मिनट के बाद (या जब समाधान स्पष्ट हो), 20 μl सतह पर तैरनेवाला को एक नई ट्यूब में स्थानांतरित करें।चयन पूरा हो गया है, और चयनित डीएनए का उपयोग बाद के प्रयोगों के लिए किया जा सकता है या लंबे समय तक -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है।

पुस्तकालय प्रवर्धन

1. 200 μl पीसीआर ट्यूब में निम्नलिखित प्रतिक्रिया तैयार करें:

अभिकर्मकों आयतन
सफाई या आकार चयन के बाद बंधाव उत्पाद 20 μl
2× HIFI लाइब्रेरी पीसीआर मास्टर मिक्स 25 μl
एमजीआई के लिए प्राइमर मिश्रण 5 μl
कुल 50 μl

2. भँवर को धीरे से घुमाएँ और अच्छी तरह मिलाने के लिए थोड़ी देर नीचे घुमाएँ, थोड़ी देर के लिए सेंट्रीफ्यूज करें और सभी तरल को ट्यूब के नीचे इकट्ठा करें।

3. थर्मल साइक्लर में निम्नलिखित प्रतिक्रिया करें:

तापमान समय साइकिल नंबर
95°C 3 मिनट 1
98°C 20 सेकंड

 

तालिका 2 के अनुसार चक्रों की उचित संख्या का चयन करें

60°से 15 सेकंड
72°से 30 सेकंड
72°से 5 मिनट 1
4°से -

अनुशंसितएसके लिए समाधानपीसीआर सफाई/आकार चयन(विशिष्ट चुंबकीय मनका मात्रा को वास्तविक नमूने के अनुसार समायोजित किया जाना चाहिएआकार)

1. एक उपयुक्त सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 50 μl लिगेशन उत्पाद तैयार करें।

2. नमूने में 45 μl पुनः निलंबित डीएनए चयन चुंबकीय मोती जोड़ें।धीरे-धीरे पिपेट से 10 बार (या 30 सेकंड के लिए भंवर) फूंकें।कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए नमूनों को सेते हैं।

3. मोतियों को सतह पर तैरनेवाला से अलग करने के लिए ट्यूब को एक उपयुक्त चुंबकीय रैक पर रखें।जब घोल साफ हो जाए, तो सतह पर तैरने वाले पदार्थ को पिपेट से सावधानीपूर्वक हटा दें और हटा दें (मोतियों को न फेंकें)।

4. चुंबकीय रैक में रहते हुए ट्यूब में 80% ताजा तैयार इथेनॉल का 200 μl जोड़ें।30 सेकंड के लिए कमरे के तापमान पर सेते हैं, और फिर सतह पर तैरनेवाला को सावधानीपूर्वक हटा दें और त्याग दें (मोतियों को परेशान न करें)।

5. चरण 4 को कुल दो बार धोने के लिए एक बार दोहराएं।

ध्यान दें: दूसरी बार धोने के बाद सभी दिखाई देने वाले तरल पदार्थ को निकालना सुनिश्चित करें।

6. मोतियों को तब तक हवा में सुखाएं जब तक कि चुंबकीय मोतियों की सतह पर कोई स्पष्ट चमक न रह जाए, जबकि ट्यूब ढक्कन खुले हुए चुंबकीय रैक पर हो।

नोट: मोतियों को ज़्यादा न सुखाएं, इससे डीएनए की रिकवरी कम हो सकती है।जब मोती चटकने लगें, तो वे बहुत सूखे हैं।

7. ट्यूब को चुंबकीय रैक से हटा दें।ट्यूब में 22 μl रेफरेंस बफर (10mM ट्रिस-एचसीएल, pH8.0-8.5) जोड़ें।कम से कम 10 बार या भंवर मिक्सर पर 30 सेकंड के लिए ऊपर और नीचे पाइपिंग करके अच्छी तरह मिलाएं।कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट तक सेते रहें।

8. ट्यूब को चुंबकीय रैक पर रखें।5 मिनट के बाद (या जब समाधान स्पष्ट हो), 20 μl सतह पर तैरनेवाला को एक नई ट्यूब में स्थानांतरित करें।चयन पूरा हो गया है, और चयनित डीएनए को 2-8°C पर 1-2 सप्ताह के लिए संग्रहीत किया जा सकता है या -20°C पर लंबे समय तक संग्रहीत किया जा सकता है।

[परिशिष्ट]दोतरफा चयन के लिए अनुशंसित योजना

यदि डबल-राउंड चयन की आवश्यकता है, तो हम अपेक्षित लाइब्रेरी आकार के अनुसार उपयुक्त चुंबकीय मनका मात्रा का चयन करने के लिए निम्नलिखित योजना प्रदान करते हैं।आकार का चयन अंतिम मरम्मत से पहले या प्रवर्धन के बाद किया जा सकता है।दो या दो से अधिक डबल-राउंड चयन से लाइब्रेरी की उपज बहुत कम हो जाएगी।

नीचे दी गई तालिका में लाइब्रेरी का वॉल्यूम 100 μl तक भरें।अपेक्षित लाइब्रेरी आकार के अनुसार दो राउंड में चुंबकीय मोतियों की मात्रा का चयन करें।और निम्नलिखित निर्देशों के अनुसार चयन कार्रवाई करें।

तालिका 3 डबल-राउंड चयन के लिए चुंबकीय मोतियों की अनुशंसित मात्रा

अपेक्षित लाइब्रेरी आकार 150बीपी 200 बी.पी 250 बी.पी 300 बी.पी 400बीपी 500बी.पी 600बीपी 700बीपी
मोतियों की मात्रा(μl) राउंड 1 100 90 80 70 60 55 50 45
दूसरा दौर 30 20 20 20 20 15 15 15

1. 200μl पीसीआर ट्यूब में लाइब्रेरी वॉल्यूम को 100 μl तक भरें और ए के रूप में लेबल करें। ट्यूब ए में तालिका 3 (राउंड 1) के अनुसार चुंबकीय मोतियों की एक निश्चित मात्रा जोड़ें। 30 एस के लिए पिपेट के साथ धीरे से उड़ाएं।कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए नमूनों को सेते हैं।

2. मोतियों को सतह पर तैरनेवाला से अलग करने के लिए ट्यूब ए को एक उपयुक्त चुंबकीय रैक पर रखें।जब घोल साफ हो जाए, तो सावधानी से सतह पर तैरनेवाला को एक नई ट्यूब में हटा दें और इसे बी के रूप में लेबल करें। मोतियों को हटा दें।

3. ट्यूब बी में तालिका 3 (गोल 2) के अनुसार चुंबकीय मोतियों की एक निश्चित मात्रा जोड़ें। 30 सेकंड के लिए पिपेट से धीरे से फूंक मारें।कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए नमूनों को सेते हैं।ट्यूब बी को चुंबकीय रैक पर रखें।जब समाधान स्पष्ट हो, तो सतह पर तैरनेवाला को सावधानीपूर्वक हटा दें और हटा दें।

4. चुंबकीय रैक में रहते हुए ट्यूब बी में 80% ताजा तैयार इथेनॉल का 200 μl जोड़ें।30 सेकंड के लिए कमरे के तापमान पर सेते हैं, और फिर सतह पर तैरनेवाला को सावधानीपूर्वक हटा दें और त्याग दें (मोतियों को परेशान न करें)।

5. कुल दो बार धोने के लिए चरण 6 को एक बार दोहराएं।

ध्यान दें: दूसरी बार धोने के बाद सभी दिखाई देने वाले तरल पदार्थ को निकालना सुनिश्चित करें।

6. मोतियों को तब तक हवा में सुखाएं जब तक कि चुंबकीय मोतियों की सतह पर कोई स्पष्ट चमक न रह जाए, जबकि ट्यूब बी ढक्कन खुले हुए चुंबकीय रैक पर है।

नोट: मोतियों को ज़्यादा न सुखाएं, इससे डीएनए की रिकवरी कम हो सकती है।जब मोती चटकने लगें, तो वे बहुत सूखे हैं।

7. ट्यूब बी को चुंबकीय रैक से हटा दें।ट्यूब में 22 μl रेफरेंस बफर जोड़ें।कम से कम 10 बार या भंवर मिक्सर पर 30 सेकंड के लिए ऊपर और नीचे पाइपिंग करके अच्छी तरह मिलाएं।कमरे के तापमान पर 3-5 मिनट तक सेते रहें।

नोट: यदि लक्षित कैप्चर नहीं किया जाएगा, तो रेफरेंस के लिए रेफरेंस बफर (10एमएम ट्रिस-एचसीएल, पीएच 8.0-8.5) जोड़ें।अन्यथा, निक्षालन के लिए निष्फल अल्ट्राप्योर पानी का उपयोग किया जाना चाहिए।

  • ट्यूब बी को चुंबकीय रैक पर रखें।20 μl सतह पर तैरनेवाला को एक नई ट्यूब में स्थानांतरित करें।

 

केवल अनुसंधान उपयोग के लिए

चीनी निर्माताओं से लागत प्रभावी अनुक्रमण लाइब्रेरी निर्माण किट 0
 

GDSBio एक उच्च तकनीक उद्यम है जो उच्च गुणवत्ता वाले जीवन विज्ञान उत्पादों के अनुसंधान और विकास, उत्पादन और बिक्री पर ध्यान केंद्रित करता है।कंपनी के पास एक संपूर्ण उत्पाद श्रृंखला है, जिसमें पीसीआर तकनीक मुख्य है, जो सामान्य पीसीआर, प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर, एनजीएस भंडारण, न्यूक्लिक एसिड इलेक्ट्रोफोरेसिस और अन्य आणविक जीव विज्ञान प्रौद्योगिकियों पर ध्यान केंद्रित करती है, और आणविक अनुसंधान अभिकर्मकों, आणविक इन विट्रो डायग्नोस्टिक कच्चे माल का विकास किया है। न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण और पता लगाने वाले अभिकर्मक और अन्य उत्पाद।

 
पर्यावरण के अनुकूल और मजबूत कार्टन पैकिंग

Disposable Specimen Collection Sampling Tube Virus Transport Medium Vtm St04

 
 

इस उत्पाद के बारे में अधिक जानकारी जानना चाहते हैं
मुझे दिलचस्पी है चीनी निर्माताओं से लागत प्रभावी अनुक्रमण लाइब्रेरी निर्माण किट क्या आप मुझे अधिक विवरण भेज सकते हैं जैसे कि प्रकार, आकार, मात्रा, सामग्री, आदि।
धन्यवाद!